利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建RAG1基因敲除免疫缺陷豬模型的研究

摘要： 為了利用顯微注射一步法構(gòu)建RAG1基因敲除的免疫缺陷豬模型，試驗利用CRISPR/Cas9技術(shù)針對豬的RAG1基因設(shè)計并篩選出高效的sgRNA，與體外轉(zhuǎn)錄的Cas9 mRNA按照4∶6比例混合后顯微注射到豬體外受精的受精卵中，隨后將基因編輯的受精卵移植到受體母豬輸卵管內(nèi);仔豬出生后采集耳緣皮膚組織提取基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增、T7核酸內(nèi)切酶Ⅰ酶切鑒定，以及利用Sanger法測序鑒定... （共9頁）