大西洋鮭魚Ⅳ型抗凍蛋白的表達與純化

摘要： [目的]構建Ⅳ型抗凍蛋白(AFPⅣ)大腸桿菌表達系統(tǒng),純化誘導表達的可溶性AFPⅣ,并進行質(zhì)譜鑒定。[方法]構建pET22b-His6-AFPⅣ重組質(zhì)粒,轉化大腸桿菌BL21(DE3),并優(yōu)化IPTG誘導條件,通過親和層析進行分離純化,收集樣品并凍干保存,對Ⅳ型抗凍蛋白樣品進行質(zhì)譜(MALDI-TOF-TOF)鑒定。[結果]構建了pET22b-His6-AFPⅣ重組質(zhì)粒,IPTG誘導表達產(chǎn)生可溶性AFPⅣ,且最佳誘導濃度為0.2 mmol/L,誘導時間4h,純化后AFPⅣ濃度為136μg/ml。[結論]成功構建了AFPⅣ原核表達系統(tǒng),優(yōu)化了IPTG誘導條件,重組AFPⅣ得到純化,并獲得凍干樣品5 mg,經(jīng)質(zhì)譜鑒定確認為AFPⅣ。 （共5頁）