紅螯螯蝦酚氧化酶原及其特性研究(英文)

摘要： 采用同源克隆策略和RACE技術(shù),從紅螯螯蝦Cherax quadricarinatus血細(xì)胞中克隆得到酚氧化酶原基因的全長(zhǎng)c DNA序列,共2951 bp,開放讀碼框?yàn)?995 bp,編碼665個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)的分子量和等電點(diǎn)分別為75.7 k D和6.23。酚氧化酶原含有兩個(gè)推測(cè)的tyrosinase copper-binding motifs(帶有六個(gè)組氨酸殘基)和一個(gè)thiol-ester-like motif,這些特征和其他甲殼動(dòng)物的酚氧化酶原特征相同。紅螯螯蝦酚氧化酶原氨基酸序列與通訊螯蝦Pacifastacus leniusculus、歐洲龍蝦Homarus gammarus、美洲龍蝦Homarus americanus和克氏原螯蝦Procambarus clarkii酚氧化酶原的相似率分別為68%、63%、63%和59%。酚氧化酶原基因雙酶切后連接入p ET-28a原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21后重組表達(dá)酚氧化酶原蛋白。在重組蛋白純化后,免疫新西蘭大耳兔制備得到的酚氧化酶原多克隆抗體,其效價(jià)大于1︰12800。紅螯螯蝦血淋巴、肝和鰓組織中的酚氧化酶原m RNA表達(dá)和酚氧化酶活性較高,而神經(jīng)、心、腸和肌肉中較低。中華絨螯蟹螺原體和嗜水氣單胞菌免疫紅螯螯蝦后,血淋巴細(xì)胞、肝和鰓組織中的酚氧化酶原和酚氧化酶活性在免疫后的不同時(shí)間均出現(xiàn)了顯著性的增加,此結(jié)果表明酚氧化酶原和酚氧化酶在紅螯螯蝦對(duì)抗細(xì)菌感染的過程中起到重要的免疫作用。此結(jié)果為進(jìn)一步深入研究酚氧化酶原基因和酚氧化酶的功能及其調(diào)控機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 （共9頁）