紅螯光殼螯蝦酚氧化酶原基因的克隆與表達

摘要： 為深入了解紅螯光殼螯蝦酚氧化酶原(proPO)基因的非特異性免疫機制,利用RACE技術從紅螯光殼螯蝦血細胞中克隆到酚氧化酶原基因cqproPO,cqproPO基因cDNA全長為2 962 bp,開放閱讀框為1 998 bp,編碼665個氨基酸,其結構中含有兩個銅離子結合位點,預測分子量為75.86 ku;同源性比對結果顯示,紅螯光殼螯蝦CqproPO與克氏原螯蝦酚氧化酶原的同源性最高為79%,其次是淡水螯蝦74%、挪威龍蝦69%、美國龍蝦67%等;進化分析發(fā)現(xiàn)CqproPO與克氏原鰲蝦、淡水螯蝦、挪威龍蝦、美國龍蝦等的酚氧化酶原親緣關系最近;Realtime-PCR實驗結果表明,CqproPO在血細胞中表達水平最高,其次是腸、觸角腺、鰓等;在肝胰腺中有適量表達;WSSV感染后紅螯光殼螯蝦CqproPO mRNA在血細胞、肝胰腺和鰓組織中具有不同的時空表達趨勢,但感染組和免疫后感染組mRNA表達量分別在感染后12 h和24 h達到最大值,且在3種組織中2個感染組的CqproPO表達量為對照組的1.3～2.55倍,顯著高于對照組(P<0.05),之后cqproPO基因的轉錄水平明顯下降。免疫后再受病毒感染的蝦,CqproPO mRNA的表達量在3種組織中總體高于感染組,感染7 d后的免疫保護率達到51.86%,表明免疫增強劑可使機體的抗病毒能力增強,對防御WSSV感染具有一定的免疫保護作用。 （共12頁）