SCoT結(jié)合克隆測序鑒別湖南甜橙變異類型

摘要： 本試驗對SCoT反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化,并篩選合適的引物,然后對24份試材進(jìn)行SCoT標(biāo)記,獲得的目的片段克隆測序,通過測序結(jié)果探討其遺傳變異;結(jié)果表明,甜橙SCoT標(biāo)記的20μL優(yōu)化反應(yīng)體系為:DNA模板80ng,Mg2+濃度1.6mmol/L,dNTPs濃度0.3mmol/L,引物濃度0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.6U,擴增產(chǎn)物在100～2000bp之間,擴增條帶明亮清晰,反應(yīng)體系具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。24份試材的測序片段的大小為1090～1091bp,一致性達(dá)到99.84%,存在單堿基的缺失與替換,BLAST結(jié)果顯示,該序列的編碼蛋白質(zhì)與核糖體蛋白S3的N端同源性高;利用單堿基變異可以區(qū)分其中的12個甜橙變異株系和'安江香柚',其他變異株系還需要結(jié)合其他的分子標(biāo)記技術(shù)來進(jìn)行鑒別,有待進(jìn)一步研究。 （共7頁）