雪松疫霉(Phytophthora lateralis)的快速分子檢測(cè)

摘要： 由雪松疫霉(Phytophthora lateralis)引起的疫病是一類(lèi)植物檢疫性病害。為建立該病原菌的快速檢測(cè)技術(shù),本文比較分析了雪松疫霉和其他疫霉的tRNA序列,在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了一對(duì)檢測(cè)雪松疫霉的特異性引物T1/T2,該對(duì)引物從雪松疫霉中擴(kuò)增得到1條192 bp的條帶,而其他15種疫霉和其他真菌菌株均無(wú)擴(kuò)增條帶,表明該對(duì)引物對(duì)雪松疫霉具有特異性。在25μL PCR反應(yīng)體系中,引物T1/T2檢測(cè)靈敏度為10 pg基因組DNA;而以引物T3/T4和T1/T2進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增,能夠檢測(cè)到1 fg基因組DNA,使檢測(cè)靈敏度提高了10 000倍。該檢測(cè)體系對(duì)滅菌水中游動(dòng)孢子的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.5個(gè)游動(dòng)孢子,對(duì)人工接種發(fā)病的植物組織能夠特異性地檢測(cè)到該病原菌。此外,進(jìn)一步建立了該病原菌的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系。 （共8頁(yè)）