嗜麥芽窄食單胞菌產(chǎn)氨基糖苷類修飾酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ的克隆與表達(dá)

摘要： 目的對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌臨床分離株gzch810(SMgzch810)攜帶的產(chǎn)氨基糖苷類修飾酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序及原核表達(dá),為下一步功能試驗(yàn)的開(kāi)展提供基礎(chǔ)材料。方法提取SMgzch810基因組染色體,PCR擴(kuò)增APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ全基因并克隆入pMD18-T載體進(jìn)行核苷酸序列分析;將APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因克隆至表達(dá)載體pGEX-4T-1,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表達(dá)情況。結(jié)果以染色體DNA為模板,成功擴(kuò)增800bpAPH(3′′)-Ⅰ基因和550bpAAC(2′)-Ⅰ基因;序列比對(duì)分析顯示其與相關(guān)報(bào)道序列核苷酸和氨基酸一致性分別達(dá)91%及95%;SMgzch810APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ序列已登錄GenBank(登錄號(hào):HQ315852和HQ315853);SDS-PAGE顯示,融合基因表達(dá)的蛋白相對(duì)分子質(zhì)量分別約為56×103和46×103。結(jié)論從SMgzch810中成功克隆及表達(dá)了APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因,為下一步檢測(cè)上述兩種重組體大腸桿菌對(duì)相應(yīng)抗菌藥物的耐藥性及其功能評(píng)價(jià)做好準(zhǔn)備。 ... （共3頁(yè)）