轉(zhuǎn)錄抑制劑DRB和α-Amanitin對(duì)A549細(xì)胞中Nrf2定位影響的研究

摘要： 目的:利用細(xì)胞核亞細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的一些特異性蛋白質(zhì)SC35、核孔復(fù)合體(nuclear porecomplex,NPC)、RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)及Y12等標(biāo)記亞細(xì)胞器,探討轉(zhuǎn)錄抑制劑5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranosylbenzimidazole(DRB)與α-Amanitin對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中Nrf2的表達(dá)與定位的影響。方法:①50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分別作用于A549細(xì)胞1 h和6 h后,Western blotting檢測(cè)Nrf2及其相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。②50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分別處理A549細(xì)胞1 h,利用免疫熒光細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Nrf2、SC35、NPC、RNAPolⅡ、Y12形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化,并研究Nrf2定位的變化。結(jié)果:①與對(duì)照組相比,DRB和α-Amanitin作用1 h后,Nrf2及其調(diào)控的下游基因HO-1、AKR1C和NQO1的蛋白質(zhì)表達(dá)變化不明顯,但6 h作用后,這些蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯降低。②激光共聚焦顯微鏡觀察顯示,細(xì)胞經(jīng)DRB和α-Amanitin處理1 h后,SC35的熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng),PolⅡ的熒光強(qiáng)度減弱,而Nrf2的定位無(wú)明顯改變;NPC、Y12的表達(dá)無(wú)明顯變化,且與Nrf2無(wú)共定位現(xiàn)象。結(jié)論:DRB和α-Amanitin能抑制Nrf2及其HO-1、AKR1C和NQO1的表達(dá),但是對(duì)Nrf2的定位沒(méi)有顯著影響。 ... （共6頁(yè)）