人肉芽組織成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立及其CD分子、蛋白表達(dá)研究

摘要： 目的建立穩(wěn)定的人肉芽組織成纖維細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)體系,并探討其生物學(xué)特性,為進(jìn)一步研究成纖維細(xì)胞在人創(chuàng)面愈合中的作用提供參考。方法采用機(jī)械法和酶消化法分離培養(yǎng)人創(chuàng)面肉芽組織成纖維細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及增值情況;分別繪制第3、5、10代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)第3代細(xì)胞表面標(biāo)志CD105、CD73、CD90、CD44、CD34、CD45、CD19、CD11b及HLA-DR的表達(dá)。取第3代細(xì)胞行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)vimentin和CK19的表達(dá)情況。結(jié)果原代培養(yǎng)出的成纖維細(xì)胞呈短梭形、多角形或不規(guī)則形;體外培養(yǎng)連續(xù)多次傳代后獲得形態(tài)較均一的成纖維細(xì)胞,以梭形為主,細(xì)胞呈放射狀排列;細(xì)胞增殖良好,第3、5、0代細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯差異,有明顯的指數(shù)生長(zhǎng)期,體外能長(zhǎng)期培養(yǎng)存活,并保持不分化狀態(tài)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞高表達(dá)CD105、CD73、CD90、CD44等間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志,不表達(dá)CD34、CD45、CD19、CD11b、HLA-DR等造血干細(xì)胞表面標(biāo)志。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)vimentin陽(yáng)性表達(dá),CK19陰性表達(dá)。結(jié)論建立了穩(wěn)定的人創(chuàng)面肉芽組織成纖維細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)體系,獲得的成纖維細(xì)胞表現(xiàn)出間充質(zhì)干細(xì)胞的CD分子表型,有可能在皮膚創(chuàng)面修復(fù)中發(fā)揮重要作用。 ... （共5頁(yè)）