人轉(zhuǎn)化生長因子β1抗原決定簇與乙型肝炎核心抗原融合肽苗的構(gòu)建與表達

摘要： 目的原核表達、純化人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)抗原決定簇與乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的基因工程融合肽苗,并測定其抗原性。方法利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法獲得人TGFβ1抗原決定簇成熟編碼區(qū)編碼79-108位氨基酸的32肽基因片斷,將其嵌合于HBcAg主要免疫優(yōu)勢區(qū),構(gòu)建符合開放讀碼框要求的重組嵌合表達質(zhì)粒pET28a/HBcAg1-71-TGFβ132-HBcAg89-144,在大腸桿菌BL-21(DE3) 中表達,利用鎳-亞硝胺乙酸-組氨酸親和層析法純化蛋白。電鏡觀察,酶聯(lián)免疫吸附法及western blot檢測融合蛋白的TGF β1和HBcAg抗原性。結(jié)果原核表達融合蛋白相對分子量為2.46×104,與理論預(yù)測一致,能形成顆粒,較天然的HBcAg顆粒大;具有TGFβ1抗原性而無HBcAg抗原性。結(jié)論構(gòu)建的pET28a/ CTC融合蛋白可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗TGFβ1抗體,為進一步動物實驗及阻斷TGFβ1抗纖維化治療奠定基礎(chǔ)。 ... （共4頁）